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猪细小病毒

猪细小病毒感染可以依据临床症状和流行病学做出初步诊断,如果发生流产、产死胎、异常胎儿而没有其他别的什么临诊症状。同时有其他证据可判定是一种传染病时,应考虑到细小病毒感染的可能性。但是进一步确诊必须进行实验室诊断。但大于70日龄的木乃伊胎儿、死产仔猪和初生仔猪则不宜送检,因为其中含有相应的抗体而干扰检验。常用的实验室检测方法有病毒分离鉴定、血凝及血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体试验、乳胶凝集试验等,到核酸探针、聚合酶链式反应( PCR)等,但是各种诊断方法各有利弊,其中血凝及血凝抑制试验已经得到了国内外学者的普遍认可,在临床检测中被广泛应用。

(一)病毒分离鉴定

病毒分离鉴定是直接检测病原,常需要配合免疫荧光技术,其用于诊断的最大优点是结果准确可靠,可以作为最后确诊,病毒分离应采集流产胎儿或死胎的肾、睾丸、肝、肺、肠系膜淋巴结或母猪胎盘、阴道分泌物(其中以肝及肠系膜淋巴结分离率最高),制成悬液,研磨制成1:5 -1:10的乳剂,加双抗处理,接种到原代仔猪肾细胞或猪传代细胞单层上,培养1 6- 36h后观察细胞核内包涵体,5 - 10d后观察特征性CPE(即细胞中出现弥散性颗粒,细胞变圆、丛集、固缩、崩解直至脱落),收毒后用血凝( HA)和血凝抑制(HI)试验或中和试验进行诊断鉴定。虽然此方法是最准确的诊断方法,但是费时费力,并且需要一定的技术条件和设备,另外,其检测结果常受到胎儿死亡时间的影响。

(二)血清学诊断

1.血凝抑制( HI)试验在猪细小病毒的血清学诊断方法中,血凝抑制( HI)试验是检测猪细小病毒抗体最常用的经典方法,一般采用试管法或微量法:利用HI试验检测人工感染PPV的猪,发现感染后5d即可检测到相应抗体,12-14d抗体滴度高达1024-4096,并能持续多年检出抗体。该方法简单、方便,灵敏度也较高。进行HI试验时待检血清需要首先进行热灭活处理,然后再用红细胞吸附,以除去血清中的非特异性血凝素,进一步用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性抑制因子。目前,该方法在国内外已得到广泛应用。

2.血清中和试验 血清中和试验( SN)也是检测PPV抗体的方法之一,其原理是利用被检血清的抗体中和PPV,然后根据培养细胞的病变情况来计算血清抗体的滴度。SN的特异性比HI高,但是SN的操作较为复杂,首先要进行病毒感染力的测定,而PPV在低剂量时并不引起细胞病变,从而限制了该方法的使用。

3.乳胶凝集试验 乳胶凝集试验( LAT)是将浓缩的猪细小病毒悬液制成乳胶凝集抗原,与待检血清在玻璃平板上作用,观察是否出现肉眼可见的特异性凝集颗粒从而进行判定的方法。此法简便、快速、准确,可用作临床上大量血清样本的初筛。

4.酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验( ELISA)是将酶与抗体偶联并使之参与到抗原抗体反应中,依据酶催化底物所发生的变色反应程度,来指示和量化抗原抗体反应水平,从而进行抗原或抗体的检测。这种方法灵敏度高、特异性好、快速、操作简便,可用于对大规模样品的检测。


猪细小病毒典型症状

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